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      2. 附2:探針的選擇與標記(續)

        1.DNA和RNA探針其原理是克隆一段特異的DNA或RNA片段,裝載到相應的質粒中。經過質粒擴增,酶解和純化等步驟,就可以得到大量的DNA和RNA片段。更好的解決辦法是直接購買純化好的探針,其次是獲得一裝載好特異性DNA或cDNA片段的質粒。目前在國際國內都有商品化的DNA探針供應,這些探針已經嚴格純化和定量......

        2018-08-01
      3. 細胞中mRNA原位雜交技術(六)

        附2:探針的選擇與標記1.探針選擇特異性的探針必須是一段已知的基因片段。相對于膜上雜交而言,原位雜交有特殊性。即細胞和組織中的待測基因隱藏于類似于網絡狀的立體結構之中,給探針的進入帶來明顯的影響。探針能接觸到靶分子對原位雜交尤為重要。理想的探針應滿足下列要求:適當的探針長度。能對......

        2018-07-26
      4. 細胞中mRNA原位雜交技術(五)

        附表1:部分試劑配制10.1mol/L三乙醇胺-0.25%乙酸酐:三乙醇胺13.2ml,氯化鈉5g,濃鹽酸4ml,DEPC水定容至約1000ml,臨用前,一邊搖動溶液一邊加入乙酸酐2.5ml,充分混合。210×PBS:氯化鈉80g,Na2HPO4·12H2O232.3g,NaH2PO4·2H2O24.5g。加DEPC水900ml,用HCl/NaOH調pH至7.2,最后定容為1000ml。320×SSC(pH=7.0):氯化......

        2018-07-24
      5. 細胞中mRNA原位雜交技術(四)

        1原位雜交固定的目的是為了保持細胞結構,最大限度地保存細胞內DNA或RNA的水平,使探針易于進入細胞或組織。DNA較穩定,RNA易被酶解,在RNA定位上,若要使RNA的降解減少到最低限度,取材后應盡快予以冷凍或固定。2玻片包括蓋片和載玻片用熱肥皂水刷洗,自來水清洗干凈后,置于清潔液中浸泡24h,清水洗凈烘干,95%......

        2018-07-17
      6. 細胞中mRNA原位雜交技術(三)

        實驗步驟:mRNA原位雜交二.雜交與顯色1、將加入探針的雜交液先于50℃預熱,均勻涂于切片表面,加上硅化蓋玻片,放于濕盒中,50℃孵育12-16h。2、1×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗滌2次,每次10min。3、2×SSC(含50%甲酰胺),37℃洗滌10min。4、2×SSC(0.5ug/mlRNaseA),37℃洗滌30min。5、1×SSC,50℃洗滌10min。6、1×PBS(......

        2018-07-14
      7. 細胞中mRNA原位雜交技術(二)

        實驗原理及技術背景1:原位雜交組化(ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交,再應用標記物的檢測系統,在核酸原有的位置將其顯示出來的一種檢測技術。原位雜交的本質就是在一定的溫度和離子濃度下,使其有特異序列的單鏈探針通過堿基互補配對規則與組織細胞內待測的核......

        2018-07-11
      8. 熒光定量PCR

        熒光定量PCR(realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美國AppliedBiosystems公司推出的一種新定量試驗技術,它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。qRT-PCR檢測......

        2018-07-06
      9. DNA甲基化檢測

        (DNAmethylation)DNA甲基化是最早發現的修飾途徑之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因表達。......

        2018-07-06
      10. 定點突變

        定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化),包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征,是基因研究工作中一種非常有用的手段。PCR擴增客戶須知:1.客戶需提供含......

        2018-07-06
      11. 載體構建

        載體構建(vectorconstruction)是把連接好的DNA分子運送到受體細胞中去。首先,必須尋找一種能進入細胞、在裝載了外來的DNA片段后仍能照樣復制的運載體。理想的運載體是質粒(plasmid),在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體。在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因......

        2018-07-06
      12. Western-blot

        蛋白質印跡法即WesternBlot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。蛋白印跡法......

        2018-07-06
      13. 甲基化檢測方法

        一.服務介紹基本原理在于:樣本經亞硫氫酸鹽處理后,甲基化的胞嘧啶(C)保持不變,但非甲基化的胞嘧啶被轉化成脲嘧啶,因此在利用該處理產物作為模板的PCR產物中,甲基化的胞嘧啶還是胞嘧啶,但非甲基化胞嘧啶變成了脲嘧啶(胸腺嘧啶),此時檢測到的胞嘧啶(C)即是樣品中本身的甲基化位點二.實驗方法以及步驟......

        2018-07-06
      14. 原位雜交

        一.服務介紹原位雜交原理在細胞或組織結構保持不變的條件下,使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。二.實驗方法和步驟原......

        2018-07-06
      15. DNA純化實驗

        一.服務介紹DNA純化可以:(1)獲得高純度的DNA;(2)濃縮DNA;(3)用于測序、遺傳信息分析等分子生物學應用。二.實驗原理以及器材。實驗方法原理:硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被......

        2018-07-06
      16. 線粒體和液泡系的超活染色與觀察

        一.服務內容線粒體活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。其目的是顯示生活細胞內的某些結構,而不影響細胞的生命活動和產生任何理化變化以致引起細胞死亡?;钊炯夹g可用來研究生活狀態下的細胞形態結構和生理、病理狀態。根據所用染色劑的性質和染色方法的不......

        2018-07-06
      17. 細菌基因組DNA的提取方法

        一.服務介紹細菌基因敲除實驗原理真核生物的一切有核細胞(包括培養細胞)都能用來制備基因組DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內,因此,制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋......

        2018-07-06
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