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        免疫實驗技術

      2. 基因敲除的原理與方法

        一.概述:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被......

        2018-03-05
      3. 石蠟切片步驟

        前陣子聽說上海生科院320大院的馬同學正在使用CST的PD-L2抗體(#82723)在多種人組織上進行免疫組化實驗。然而,多次實驗均無法得到結果,切片上的細胞「團滅」而歸。CST技術人員聞悉后,決定進行實地探訪,與科研人員一起,找到問題所在。前期準備在經過前期與馬同學的討論后,決定在這次測試中,對原protocol......

        2018-02-26
      4. 間接免疫熒光法檢測自身抗體

        自身抗體診斷的標準技術是間接免疫熒光法,其特點是特異性強,陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯,通過顯微鏡觀測能夠精確地判斷組織或細胞內熒光的分布。自身抗原的位置決定了其相應抗體的典型的熒光模式,所有與此典型模式不相關區域的染色被認為是非特異性染色。即使偶爾伴有強的非特異性染色,但弱......

        2017-12-09
      5. 葉綠體的分離與熒光觀察

        實驗方法原理免疫實驗技術組織勻漿后懸浮在等滲介質中進行差速離心,是分離細胞器的常用方法。一個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀、密度、離心力及介質黏度等。同一離心場中,同一時間內,密度和大小不同的顆粒沉降速率不同。依次增加離心力和離心時間,就能使非均一的懸浮液中的顆......

        2017-11-08
      6. 雙向免疫擴散(Double immunodiffusion)—抗原分析實驗

        一、基本原理雙向免疫擴散是指可溶性抗原與相應抗體在瓊脂介質中相互擴散,彼此相遇后形成一定類型的特異性沉淀線。沉淀線的特征與位置不僅取決于抗原抗體的特異性及相互間比例,而且與其分子大小及擴散速度相關。當抗原、抗體存在多個系統時,可呈現多條沉淀線乃至交叉反應。依據沉淀線的形態、......

        2017-10-31
      7. 免疫共沉淀技術路線指南

        準備工作:免疫共沉淀預冷PBS,RIPABuffer,細胞刮子(用保鮮膜包好后,埋冰下),離心機1.用預冷的PBS洗滌細胞兩次,最后一次吸干PBS;2.加入預冷的RIPABuffer(1ml/107個細胞、10cm培養皿或150cm2培養瓶,0.5ml/5×106個細胞、6cm培養皿、75cm2培養瓶)3.用預冷的細胞刮子將細胞從培養皿或培養瓶上刮下,把懸液轉到......

        2017-10-27
      8. 免疫熒光的 10 種檢測方法你知道嗎?

        標記免疫技術發展最早的一種是免疫熒光,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光步驟包括,細胞固定和通透,封閉,孵育一抗,二抗等。除了這些基本步驟,接下來的實驗方法希望可以幫到您。......

        2017-10-23
      9. 免疫熒光實驗方法中需要注意的環節

        免疫熒光方法中的重要環節1、冰凍切片制備建議用新鮮組織,否則組織細胞內部結構破壞,易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等,防止裂片和脫片嚴重。2、組織切片固定切好片風干后立即用冰丙酮等固定液進行固定5-10min,尤其要較長時間保存的白片,一定要及時固定和適當保存。3、血清......

        2017-10-17
      10. 酶聯免疫吸附實驗

        酶聯免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各種細胞內成份的定位。(2)研究抗酶抗體的合成。(3)顯現微量的免疫沉淀反應。(4)定量檢測體液中抗原或抗體成份。實驗方法原理雙抗體夾心法(測抗原)本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體,經洗滌后加入含有抗原之待測樣品,如待檢樣品中有相應抗原存在,即可與包被于固......

        2017-09-30
      11. 免疫組織化學抗原修復

        由于石蠟切片標本多數使用甲醛固定,甲醛在組織中所形成的醛鍵、羧甲基等封閉了部分抗原決定簇,或由于蛋白分子之間的交聯而使抗原決定簇隱蔽。因此在染色前有些抗原需要先進行抗原修復或暴露才能使組織中的抗原抗體充分結合,出現理想的染色結果。免疫組織染色至于哪種抗原需要進行修復。需在建立......

        2017-09-25
      12. 蛋白質免疫印跡

        實驗方法原理Western免疫印跡(WesternBlot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,"探針"是抗......

        2017-09-15
      13. 多克隆抗體制備流程

        抗原刺激機體,產生免疫學反應,由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。一般而言,抗體按靶位點不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體,由多個B淋巴細胞克隆產生的,受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結合的抗體......

        2017-09-01
      14. 酶免疫電泳技術

        一酶免疫電泳技術的原理實驗動物外包抗原與抗體在瓊脂糖凝膠中電泳時,在堿性緩沖液的條件下,抗原帶負電,向正極移動。不同分子量或還不同電荷的抗原,在相同條件下,移動距離不等。這些在不同部位的抗原,再與相關抗體經擴散形成免疫沉淀線。酶免疫電泳技術中的抗原與抗體就是酶和它的相應抗體球蛋白。......

        2017-08-28
      15. ELISA的操作要點

        優質的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說明,嚴格遵照規定操作......

        2017-08-10
      16. 組織切片的免疫金標記

        免疫金標記技術(immunogoldlabellingtechnique)是以膠體金作為示蹤物,應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。膠體金是由氯金酸在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉和鞣酸等作用下,聚合成特定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態,故稱膠體金。實驗原理:利用膠體金在堿性條件下帶......

        2017-08-08
      17. 免疫組化操作流程

        一、免疫組化操作流程(PAP法、ABC法)1.脫蠟至水:二甲苯(1)、(2)脫蠟各15min→無水乙醇(1)、(2)各5min→90%乙醇5min→水洗→PBS5min2.抗原修復:1)微波修復:微波中高檔5min3次→自然冷卻至室溫→PBS過一遍3次?min,2)酶消化:0.1%胰蛋白酶37℃孵育30min→PBS5min3.阻斷內源性過氧化物酶:置3%3次?雙氧水浸泡15min→PBS......

        2017-07-21
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